中药分析检测

·中药分析检测简述

北京清析技术研究院提供中药配方、有效成分、矿物质、重金属、理化指标、真菌毒素、农药残留、微生物等分析检测服务


·中药分析检测项目

类别详细项目
配方组成药方的各种药物名称及配比
有效成分植物有效成分:黄酮类、挥发油类、甾体及苷类、生物碱类、糖类等。

动物药有效成分:胆汁酸、牛磺酸、麝香酮、麝香醇等。
矿物质及重金属人体必须矿物质:钠(Na)、钾(K)、钙(Ca)、镁(Mg)、铁(Fe)、锌(Zn)、磷(P);

有害重金属分析:砷(As)、铅(Pb)、镉(Cd)、汞(Hg)、铜(Cu)等。
常规理化水分、灰分、酸不溶性灰分、醇溶性浸出物含量、杂质和亚硫酸盐残留量等。
真菌毒素黄曲霉毒素(Aflatoxin B1B2G1G2)、赭曲霉毒素及霉菌毒素等。
农药残留有机氯农药残留、有机磷农药残留、拟除虫菊酯类农药残留等。
兽药残留磺胺类药物、沙星类、四环素类、硝基呋喃类等。
微生物检测菌落总数、霉菌及酵母菌、大肠菌群、铜绿假单胞菌、沙门氏菌、金葡、白念等。
其他微生物限度检测、无菌试验、抑菌效果检测、中药指纹图谱等。


· 中药分析检测方法

一、实验目的
使用飞行时间高分辨质谱搜索补药药物中中西药成分,分析补药药物中西药组成成分。

二、供试品制备方法
取“样品”中药液体于2ml离心管中,放入高速离心机中13000r/min离心10min,过0.22um微孔滤膜后装入1.5ml自动进样瓶内,得到补药提取物样品。同样条件得到空白对照样品。将样品放入4℃冰箱保存,在分析前取出(保存时间不能超过24h)。

三、色谱条件
色谱仪器为:岛津LC-30A。色谱柱为Unitary C18(2.8μm,2.1mm*150mm);柱温为30℃;流速为0.3ml/min;进样量为2μl;流动相采用乙腈-0.1%甲酸水溶液的梯度洗脱程序,具体见表1。


表1 流动相梯度洗脱程序

Time(min)A(0.1%甲酸水)B(乙腈)
0.01955
156040
275100
315100
31.5955
35stop


四、色谱条件
质谱仪器为AB Sciex Triple TOF 5600+。
离子化模式为电喷雾正离子模式,离子源电压分别为 5500V,离子源温度为500℃,去簇电压(DP)分别为 100 V,碰撞能量(CE)分别为 35 eV,碰撞能量扩展(CES)分别为15eV。雾化气体为氮气,辅助气 1 为 50 PS I,辅助气 2 为 50 PSI,气帘气为 40 PSI。一级质谱母离子扫描范围为 50~1000,IDA 设置响应值超过100 cps的6个最高峰进行二级质谱扫描,子离子扫描范围为50~1000,开启动态背景扣除(DBS)。
离子化模式为电喷雾负离子模式,离子源电压分别为-4500V,离子源温度为500℃,去簇电压(DP)分别为 100 V,碰撞能量(CE)分别为 -35 eV,碰撞能量扩展(CES)分别为15eV。雾化气体为氮气,辅助气 1 为 50 PS I,辅助气 2 为 50 PSI,气帘气为40 PSI。一级质谱母离子扫描范围为50~1000,IDA 设置响应值超过100 cps的6个最高峰进行二级质谱扫描,子离子扫描范围为50~1000,开启动态背景扣除(DBS)。

五、实验结果 


图一:“样品”中药提取物正离子模式下与空白对照总离子流图

图二:“样品” 中药提取物负离子模式下与空白对照总离子流图


 
本实验查找了人参、灵芝、党参、三七、甘草、山药、熟地、白芍、枸杞、当归、麝香、黄芪、白术、冰片、陈皮、黄连、葛根、共17种中药、维生素、氨基酸及西药成分,建立起412种成分数据库,采用飞行时间高分辨质谱对“样品”中药提取物定性检测,得出结果如下:

5.1 样品中药活性成分分析
5.1.1通过无目标物搜索,从质谱图中找到响应值超过500的成分共6578种;
5.1.2通过数据库中药活性成分目标物搜索:

(1)中药活性成分检测
补药中药正、负离子模式下共检测到113种活性成分,其中质谱响应强度大于10000的活性成分共有32种,按质谱响应强度排序分别为:葛根素、樱黄素、芫花素、毛蕊异黄酮、鹰嘴豆芽素A、芒柄花苷、桉叶醇、茅术醇、β-榄香醇、毛蕊花糖苷、6-O-E麦角甾苷、白术内酯、(+)-丹芝酸 D、京尼平苷酸、没食子酸乙酯、8-表-马钱子苷酸、灵芝醛 B、齐墩果酮酸、尿嘧啶核苷、白术三醇、甘草苷、甜菜碱、柠檬酸单甲脂、2-甲氨基苯酸甲酯、芒柄花素、异鼠李素、5-羟基-6,7,8,3,4-五甲氧基黄酮、7-羟基-3,5,6,3,4-五甲氧基黄酮、5-去甲川陈皮素、刺囊酸、阔叶合欢萜酸、灵芝酸 L

(2)中药粉末组方分析
将中药中检测到的中药活性成分归类,统计检测的中药活性成分在数据库中的占比,从而判断补药中药组方。


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